不出意外，我的細胞又污染了。呃，確切地說，已經是我第四次污染細胞了（總共五次），這是第六次細胞培養。希望這次能順利長好細胞！

實際上大概問題出在下面幾點：

1）穿戴一時爽，細胞白培養

進細胞房不換鞋，不戴口罩，不戴手套，雖然感覺挺爽呼吸暢快，但其實是細胞房的大忌諱！有更嚴格的細胞房連帽子都要戴上。為什么呢？換鞋就不說了，你應該也知道有真菌吧。但你根本不能保證你口腔支原體是不是會污染細胞，每當你哈一口氣給細胞送溫暖的時候，細胞就……呵呵了。不戴手套，根本就清除不掉你手上的細菌真菌，要不你試試看拿火燎一下你的手，焦了才算滅菌。

2）紫外和酒精，亂用也不靈

 紫外和酒精能滅菌……嗎？沒錯，能滅菌，但是紫外和酒精最多只能滅細菌，對真菌傷害很小。你不戴手套，可勁用噴壺噴手是沒有什么卵用的。超凈臺為什么盡量要用酒精棉球而不是用酒精噴壺呢？因為用酒精棉球的話，可以在滅菌的同時把菌體從手上擼下去。而噴壺只能短暫滅菌而已，所以要多用棉球，少用噴壺。

3）生物安全柜，別超三八線 

 生物安全柜的玻璃窗是有警戒線的，超過這個警戒線，生物安全柜的風簾就起不到太大作用，而且會引入室內空氣中的真菌，比如你的臭鞋里的酵母啥的。還會讓你給細胞送溫暖的呼吸里，自動帶上支原體。

4）拿瓶不拿蓋，拿蓋污染快

 用細胞培養瓶來培養的時候，最最忌諱的是啥？是你拿瓶子的時候，手拿著有蓋子的那一面？為啥，因為一般來說瓶蓋開關是最容易接觸到瓶口的，你手拿著培養瓶，那手的虎口夾縫里所含有的真菌很容易就接觸到瓶蓋上，一旦造成污染，就是很嚴重的。

5）門前堆得多，霉菌找到窩 

 生物安全柜里操作的時候，門前最忌諱堆一堆雜七雜八的東西，你看看你，槍頭盒、血清、管子，培養皿、移液器、酒精噴壺、酒精燈，堆了一大堆。有的都堵住了你門前的出風口。一來你操作起來并不是井井有條，會導致動作幅度過大，擾亂氣流。二來這些東西一旦擋住風口，也會擾亂生物安全柜的氣流，氣流變化會導致外部不潔凈的空氣流入，也同樣會導致生物安全柜的潔凈作用失效。這必須要注意！

6）清潔水浴鍋，否則雜菌多

 水浴鍋是比較容易忽視的，你說你復蘇細胞的時候，37℃，對細菌真菌來說這就是溫床啊。復蘇完，濕漉漉的凍存管，任你再怎么噴酒精也并沒有什么意義了。那要怎么辦，水浴鍋一來是定期清潔，二來是加一些抑菌劑。別別別，不是讓你往里面加雙抗！水浴鍋里要加2%的硫酸銅，但這個是比較容易腐蝕水浴鍋的，所以定期也要更換清潔。

7）水盤要污染，一箱全玩完

 剛才說了水浴鍋了，那接下去講講另一個坐擁37℃溫床的水環境，也就是培養箱的水盤。有幾次我都看到水盤里飄著特別大的一塊塊霉斑。這孢子，是你不敢想象的。一污染就一箱子全報廢了，培養箱要定期用0.1%的新潔爾滅或者84清洗（交替使用，防止微生物耐藥）。水盤也一樣，水盤中加入飽和的磷酸氫二鈉可以有效預防細菌真菌，但是需要定期加入去離子水防止析出。

8）滅菌滅不好，污染隨時找

細胞房所使用的槍頭，必須要經過濕熱滅菌，但你看你，濕熱滅菌的槍頭都沒用報紙包好，不包好也就算了，滅完菌還不烤干！用報紙包裹好槍頭，是因為滅菌鍋一般在細胞房外面，所以要保證內部槍頭盒結晶。烤干是為了防止內部有水分，當你開啟槍頭盒后，有水的地方更容易被霉菌的孢子所接觸附著，也就更容易污染。所以這個也必須要注意！

9）激情移液器，污染灑滿地

你用移液器的時候，吸液這么猛力果斷，必然會把培養基或者細胞沾到移液器的口上。培養基這種東西，就是微生物的溫床啊。不弄干凈，下次再這么激情地用移液器，必然要污染，這個必須每次使用后，用75%的乙醇，或者5%的硫酸銅，或者0.1%的新潔爾滅來擦一下的。這樣可以防止一些污染。

好了，說了這么多，這些就是你在操作的過程中，時刻需要注意的事情，養細胞不難，也不易。要不污染，就全要靠你時時刻刻把“無菌操作”這四個字記在腦海里。好了，今天就策這么多了，祝你們心明眼亮。

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